Implementação de estudos de metabolismo in vitro: Comparação da adição de NADPH e sistema regenerador de NADPH

Introducao: Cerca de 40% do insucesso da introducao de novos farmacos no mercado esta relacionado a elevada toxicidade e caracteristicas farmacocineticas inadequadas, e estas caracteristicas podem ser investigadas atraves de ensaios in vitro e in vivo. Os estudos in vitro contribuem para a diminuicao dos custos do desenvolvimento de novos produtos e reducao do numero de animais. Considerando que o metabolismo interfere em parâmetros farmacocineticos como clearance, meia-vida e biodisponibilidade, a implementacao de ensaios in vitro de estabilidade metabolica constitui importante ferramenta para selecionar, dentre as novas moleculas, as mais promissoras a continuidade do desenvolvimento. A metodologia mais utilizada nesse tipo de avaliacao consiste no uso de microssomas, parte do hepatocito que contem a maior parte das enzimas responsaveis pelo metabolismo de xenobioticos. Nesses ensaios, e necessaria a adicao de NADPH, coenzima fornecedora de equivalentes redutores nas reacoes de biotransformacao de farmacos. No entanto, existem duas formas de procedimentos para a realizacao do ensaio de estabilidade metabolica: com a adicao direta do NADPH ou com a adicao do sistema regenerador de NADPH. A primeira, apesar de tornar o experimento mais simples e preciso, gera altos custos alem de incertezas na confiabilidade dos resultados, uma vez que as moleculas analisadas, por serem novas, tem as suas caracteristicas desconhecidas e, portanto, nao se sabe a quantidade necessaria de NADPH para transcorrer todo o ensaio. A ultima, em contrapartida, recicla a coenzima no decorrer do ensaio, portanto nao permite esgotar o NADPH, porem e um sistema que requer preparo pelo pesquisador, aumentando o numero de interferentes. Diante do pressuposto, o grupo de pesquisa da FCFAr/UNESP comparou os dois procedimentos de estudo de estabilidade metabolica in vitro, para confirmar a robustez e confiabilidade do sistema regenerador de NADPH. Objetivo: Comparar ensaios de estabilidade metabolica em microssomas, usando diclofenaco de sodio como farmaco modelo, nas duas situacoes distintas: com a adicao de NADPH e com a adicao do sistema regenerador de NADPH. Metodologia: Avaliacao do decaimento dos niveis do diclofenaco de sodio nos ensaios com a adicao direta do NADPH e com a adicao do sistema regenerador de NADPH, por ser um farmaco amplamente utilizado em estudos de metabolizacao nessas duas situacoes. A quantificacao foi atraves da analise por LC-MS/MS. Resultados e discussao: O sistema de NADPH adicionado direto e o sistema regenerador de NADPH apresentaram resultados semelhantes, portanto o sistema regenerador nao apresentou nenhuma interferencia na estabilidade metabolica do farmaco. Conclusao: O sistema regenerador analisado pode ser utilizado para posteriores estudos de estabilidade metabolica in vitro, contribuindo na diminuicao dos custos do experimento.