Analysis of YMDD mutants in hepatitis B virus infected patients with lamivudine therapy by restriction fragment length polymorphism (RFLP) of the PCR products

目的建立用PCR-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP),分析拉米夫定抗HBV感染中聚合酶YMDD变异方法. 方法在拉米夫定抗HBV治疗过程中HBV DNA由阴性再次转为阳性患者及HBV DNA始终保持阳性的血清达1年或1年以上,用3对引物扩增HBV P基因的C区,扩增产物分别用3个限制性内切酶分析,酶切结果用8.4%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析.检测HBV YMDD变异,同时血清用全自动测序仪检测YMDD变异.分析比较两者结果. 结果 35例病人,包括33例HBV DNA再次阳性患者,2例用药1年HBV DNA未转阴.14例病人出现YMDD变异.PCR-RFLP结果为6例YVDD变异、4例YIDD、1例YI/MDD、21例YMDD与测序一致.另3例PCR-RFLP结果为YI/VDD,即混合变异,测序报告为2例YIDD、1例YVDD,分析相应的测序图,存在混合变异.并把YIDD与YVDD变异的血清混合,行PCR-RFLP,结果与YI/VDD一致. 结论用PCR-RFLP能快速、简便、灵敏地检测YMDD变异.