Récepteurs nucléaires de l'acide rétinoïque et concentrations cellulaires efficaces : implication dans la réponse au traitement différenciateur des leucémies aiguës promyélocytaires

Nous presentons dans cette etude les pharmacocinetiques plasmatiques et intracellulaires de l'acide retinoique tout-trans (ATRA) dans les leucemies aigues promyelocytaires, et la caracterisation des recepteurs nucleaires de l'ATRA dans ces cellules. La mise au point de techniques specifiques d'extraction et d'analyse par HPLC de l'ATRA et de ses derives (9-cis, 13-cis et 4-oxo metabolites), nous a permis de montrer que des concentrations importantes d'ATRA (2x10-6M) sont atteintes rapidement au niveau du plasma. A l'interieur des cellules, l'ATRA penetre tres rapidement ( en quelques minutes) et les concentrations atteintes sont correlees au degre de differenciation des cellules et a la reponse in vivo des patients. L'etude des metabolites plasmatiques et intracellulaires de l'ATRA, met en evidence des quantites faibles de l'AR 9-cis, d'AR 13-cis et pas d'oxo-metabolites. Une conversion rapide de ces derniers en derives polaires instables, dont les hydroxy ou d'autres molecules non identifiees, pourrait expliquer leur faible abondance. Les cellules blastiques des LAM³ possedent une translocation chromosomique t(15 ;17), qui fusionnent un allele du gene RARa au gene PML. Le role putatif des proteines de fusion resultantes et de la proteine RARa normale dans la differenciation, represente un point capital dans la comprehension de leurs implications dans les phenomenes de leucemogenese et de reponse a l'ATRA. Nos resultats de purifications (HPLC, FPLC) et d'etude de l'affinite des recepteurs nucleaires de l'acide retinoique apportent un element supplementaire. En effet, nous avons montre que l'affinite des recepteurs nucleaires des cellules HL –60 est proche de celle retrouvee dans les cellules COS transfectees par RARa ou PML-RARa et que par contre, l'affinite des recepteurs nucleaires presents dans les cellules promyelocytaires NB4 est inferieure. Nous avons, par ailleurs, montre une modulation de la proteine RARa normale dans les cellules LAM 3. Ainsi, l'induction de l'allele normal pourrait expliquer, au moins en partie, l'effet therapeutique de l'ATRA dans les LAM3, par le biais d'une competition fonctionnelle entre l'activite normale stimulee par le traitement et l'activite pathologique, resultat de la translocation. L'ATRA, permettrait la reversion du phenotype malin en restaurant une regulation " physiologique " des voies de controle de la differenciation cellulaires.