RNA干扰沉默Cyclin D1基因对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨以细胞周期蛋白（Cyclin）D1为靶基因的RNA干扰对胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响，为胰腺癌的靶向治疗提供依据。方法用含有10％FBS的DMEM培养液在37℃、5％CO2培养箱中常规培养AsPC-1细胞，至对数生长期后接种于96孔培养板中，随机分为实验组、阴性对照组、空白对照组，并采用Lipo-fectamine^TM 2000脂质体分别转染Cyclin D1-小干扰RNA（siRNA）、阴性对照siRNA、脂质体，48h时收集细胞。应用荧光定量PCR法和Western blot法分别检测细胞中Cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平，MTT法检测细胞体外增殖活力，流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率（AI）。结果与空白对照组和阴性对照组相比，实验组Cyclin D1 mRNA和蛋白表达均明显下调，细胞生长速度明显减慢，G0／G1细胞比例显著增大、S期细胞比例则明显降低、AI显著升高（P均〈0．01）。结论Cyclin D1-siRNA能通过沉默靶基因表达抑制AsPC-1细胞生长、改变细胞周期分布、诱导细胞凋亡，可作为胰腺癌基因治疗的一个有效靶点。