过表达 Gata 6诱导分离猪胚外内胚层干细胞样细胞

本研究对Gata6（G6）在猪诱导多能性干细胞（iPS细胞）以及胚外内胚层干细胞（XEN细胞）样细胞分离中的作用进行深入解析。从农大香猪的胎儿组织提取mRNAs，反转录为cDNAs，以此为模板克隆所需基因，构建逆转录病毒质粒pMXs-pOct4、pMXs-pSox2、pMXs-pKlf4、pMXs-pMyc、pMXs-pGata6、pMXs-pLin28、pMXs-pTbx3以及pMXs-pNanog，运用不同的基因组合感染猪胎儿成纤维细胞（PEF）。结果表明， Gata 6与 Oct 4、 Sox 2、 Klf 4和 mMyc （简称G6OSKM）共转染可以提高早期重编程效率， Gata 6代替 Oct 4，与 Sox 2、 Klf 4和 mMyc （简称G6SKM）可以诱导猪胎儿成纤维细胞为iPS（Induced pluripotent stem）细胞，但与OSKM（ Oct 4、 Sox 2、 Klf 4和 mMyc ）组相比，重编程效率下降。 Gata 6的过表达使获得的猪iPS细胞在重编程后期发生了分化，形态类似XEN细胞，这些细胞在小鼠胚外内胚层干细胞培养液培养可以维持XEN细胞的形态，表达胚外内胚层干细胞的标记基因，如 Gata 4、 Gata 6和 Sox 17。OSKM 4因子获得的猪iPS细胞过表达 Gata 6后，也可以产生胚外内胚层干细胞样细胞。综上表明，过表达Gata6可以进行猪胚外内胚层干细胞样细胞的分离，为从正常胚胎对猪XEN细胞的分离与建系，以及猪早期胚胎调控机制的解析提供理论依据。