Nuclear localization signals enhance integration and expression of human α1, 2-fucosyltransferase gene in mice

目的 探讨核定位信号肽(NLS)在转人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因小鼠制备中的作用.方法将受精卵随机分为3组,采用显微注射的方法制备转基因小鼠.实验组:将NLS转基因构件与人HT转基因构件同时导入细胞质;对照Ⅰ组:将人HT转基因构件导入细胞质;对照Ⅱ组:将人HT转基因构件导入细胞核.应用聚合酶链反应(PCR)、Southern杂交及逆转录(RT)-PCR等方法检测人HT基因在G0代小鼠体内的整合与表达,应用流式细胞计数(FCM)检测转基因小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表面H抗原与α-Gal抗原的表达.结果实验组与对照Ⅰ组G0代小鼠的出生率33.8%(46/136)及35.4%(23/65)高于对照Ⅱ组10.2%(51/498)(P＜0.01),实验组人HT基因的整合率(30.4%,14/46)高于对照Ⅰ组(0,0/23)与对照Ⅱ组(11.8%,6/51,P＜0.01),实验组人HT基因的表达率(19.6%,9/46)也高于对照Ⅰ组(0,0/23)和对照Ⅱ组(5.9%,3/51,P＜0.01),人HT mRNA在小鼠心、肝、肾和骨骼肌组织中均表达阳性.转基因小鼠PBMCs表面H抗原表达阳性,表达强度为人的85%～190%,同时α-Gal抗原表达显著降低,为正常小鼠的5%～12%.转基因小鼠已经稳定传3代.结论NLS基因与目的基因细胞质共注射是制备转基因小鼠简便实用的新方法。