MicroRNA-17家族真核表达载体的构建及其对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响

目的 构建miR-17家族（miR-17、miR-20a、miR-20b、miR-93、miR-106a、miR-106b）真核表达载体,探究它们对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖的影响.方法 通过EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切真核表达载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR,得到大片段后与人工合成的miR-17家族成熟体5p的寡聚核苷酸连接,通过DNA测序、BLAST检验以及双酶切电泳方法验证是否成功构建miR-17家族的真核表达载体.将构建成功的载体,用Lipofectamine2000瞬时转染人肝癌SMMC-7721细胞,应用real-time PCR方法检测miR-17家族表达水平,用CCK8法检测细胞增殖能力的变化.结果 双酶切真核表达载体pcDNA 6.2-GW/EmGFP-miR,得到的大片段与人工合成的miR-17家族成熟体5p寡聚核苷酸连接,通过DNA测序、BLAST检验及双酶切电泳的方法验证成功构建了miR-17家族真核表达载体.瞬时转染人肝癌SMMC-7721细胞后miR-17家族表达水平有了显著增加,能够促进SMMC-7721细胞的体外增殖.结论 成功构建miR-17家族真核表达载体,得到瞬时转染miR-17家族的人肝癌SMMC-7721细胞,并观察到miR-17家族过表达可以促进人肝癌细胞的增殖.