Caracterización bioquímica y genética de enterocinas producidas por cepas de "Enterococcus faecium" de origen cárnico : optimización de la producción molecular de acción de la enterocina P de "Enterococcus faecium" P13

En primer lugar, se identificaron las bacteriocinas producidas por Enterococcus faecium AA13, E. faecium G16 y E. faecium P21, tres cepas aisladas de chorizos espanoles artesanos. Tras purificar a homogeneidad las bacteriocinas, se determino su secuencia aminoacidica mediante degradacion de Edman y, seguidamente, la secuencia nucleotidica de sus determinantes geneticos mediante clonacion, PCR y secuenciacion nucleotidica. Los resultados obtenidos indicaron que E. faecium AA13 y E. faecium G16 producen la enterocina P y que E. faecium P21 produce las enterocinas A y B. A continuacion, se determinaron las condiciones optimas para la produccion de enterocina P por E. faecium P13 en un fermentador de mesa que contenia medio MRS a 32oC y a un pH constante de 4,7; 5,0; 5,3; 5,7; 6,0; 6,2; 7,0 y 8,5. La produccion maxima de enterocina P se obtuvo a pH 6,0 y represento un incremento de cuatro veces con respecto a la obtenida en un cultivo control desarrollado sin control del pH. Seguidamente, se estudio el mecanismo molecular de accion de la enterocina P en celulas del microorganismo sensible E, faecium T136, en liposomas derivados de este y en liposomas sinteticos compuestos de dioleilfosfoglicerol (DOPG) y dioleilfosfocolina(DOPC) en proporcion equimolar. La enterocina P ejerce una accion bactericida no litica en este microorganismo, y, a nivel molecular, produce la disminucion del ATP intracelular, el movimiento transmembrana de cationes K+ y la disiupacion del potencial de membrana de la fuerza promotriz (PMF) sin afectar a su gradiente de pH. La enterocina P altera la permeabilidad de liposomas derivados del microorganismo sensible, pero no la de liposomas sinteticos con la composicion mencionada. Finalmente. se evaluo la eficacia de la Ruta General de Secrecion de Escherichia coli en el transporte y procesamiento de la enterocina P. Los resultados obtenidos sugieren que dicho sistema es ineficaz en la secrecion de la enterocina P.