EXPRESSÃO E CARACTERIZAÇÃO DE UM FRAGMENTO DA GLICOPROTEÍNA E DO HERPESVÍRUS BOVINO TIPO 1 E USO EM UM TESTE SOROLÓGICO DIFERENCIAL

O herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1) e um virus de distribuicao mundial e produz grandes prejuizos economicos em rebanhos de corte e de leite. A infeccao pelo BoHV-1 produz manifestacoes respiratorias, reprodutivas e tambem pode cursar com sinais nervosos. Existem diversos testes laboratoriais capazes de diagnosticar a infeccao. Contudo, as tecnicas sorologicas empregadas atualmente nao sao capazes de diferenciar anticorpos produzidos pela vacinacao daqueles produzidos em resposta a infeccao natural. Assim, vacinas diferenciais com delecao da glicoproteina E (gE) tem sido desenvolvidas com essa finalidade. No entanto, necessita-se tambem de testes capazes de diferenciar a producao de anticorpos vacinais dos induzidos pelo virus vacinal. Com essa finalidade, essa dissertacao relata a expressao e caracterizacao de um fragmento da glicoproteina E do BoHV-1 e seu uso no desenvolvimento e padronizacao de um ELISA indireto para deteccao de anticorpos anti-gE. Um fragmento de 651 nucleotideos correspondente ao terco amino-terminal (217 aminoacidos) do gene da gE do BoHV-1, que possui uma alta identidade com o homologo herpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5), foi clonado com proteina de fusao 6xHis-tag em Escherichia coli utilizando vetor de expressao pET16b. Uma proteina soluvel de aproximadamente 25kDa foi purificada a partir de lisados de E. coli transformadas. A proteina recombinante foi detectada por Western blot (WB) por anticorpos monoclonais anti-histidina e anti-gE do BoHV-1. Anticorpos presentes no soro de animais infectados com BoHV-1 e BoHV-5 reagiram especificamente com a proteina recombinante no WB. Alem disso, camundongos imunizados com a proteina purificada desenvolveram anticorpos que reconheceram a gE viral proveniente de lisados de monocamadas celulares infectadas com BoHV-1 e BoHV-5. Um ELISA indireto para deteccao de anticorpos anti-gE, baseado na proteina expressa, foi capaz de diferenciar sorologicamente animais vacinados com a cepa gE deletada do BoHV-5 dos animais experimentalmente infectados com BoHV-1 ou BoHV-5. Esses resultados demonstram que o antigeno obtido conservou suas caracteristicas imunologicas e pode ser utilizado na deteccao sorologica das infeccoes por herpesvirus bovinos. Possui potencial para uso em grande escala como antigeno em testes de ELISA para diferenciar animais naturalmente infectados de animais vacinados com a cepas defectivas na gE%%%%Bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1) is distributed worldwide and produces high economic losses to the in livestock industry. BoHV-1 infection causes respiratory, reproductive and may also be associated with neurological signs. There are several tests that can diagnose the infection, however, serological techniques currently used are not able to differentiate antibodies produced by vaccination from those produced in response to natural infection. What is sought is a mean to differentiate vaccinated animals of those infected by the field strain. Vaccines with deletion in the glycoprotein E (gE) gene have been developed for this purpose. However, this…