B7-1与GM-CSF双顺反子慢病毒转染骨髓基质细胞的研究

目的研究B7-1和粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）双基因共表达慢病毒载体是否可介导目的基因在人骨髓基质细胞（MSCs）有效表达。方法采用改良的磷酸钙沉淀法将包装质粒、包膜蛋白质粒和含目的基因的转移质粒共转染293T包装细胞，收集的病毒上清感染密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养的MSCs，用荧光显微镜和流式细胞术（FCM）分析转导细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达，RT-PCR分析目的基因在转导细胞的表达。结果密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养第三代的MSCs，CD90表达阳性率达到93．62％，包装好的慢病毒颗粒可成功感染293T包装细胞和MSCs，用荧光显微镜和FCM均可检测到转染细胞中GFP表达，阳性率分别为77．66％和43．97％，RT-PCR方法可扩增出转染细胞表达B7-1和GM-CSF基因片段。结论B7-1和GM-CSF双基因共表达慢病毒载体可高效转移目的基因至骨髓基质细胞并获得有效表达。