nanoLC—ESI／MS／MS在ECV304细胞蛋白质组学研究中的应用

目的：应用纳升液联用技术（nanoLC—ESI／MS／MS）对ECV304细胞蛋白质组学进行初步分析。方法：提取ECV30d细胞总蛋白，经变性、还原、烷基化和酶解，nanoLC—ESI／MS／MS对酶解后的肽段进行分析，数据库（Swissprot）检索鉴定蛋白质，生物信息学工具对所鉴定的蛋白质进行细胞定位和功能分类。结果：从8μg细胞总蛋白中鉴定了120种蛋白质，所鉴定蛋白质的分子质量（MW）范围从6648D至280739D，MW〈20kD的蛋白质占24．2％，MW〉100kD的蛋白质占5．0％；主要位于细胞质、细胞骨架、细胞核和细胞膜，分别为27．8％、19．0％、15．2％和10．1％；大多为结构蛋白质和催化活性的蛋白质，分别为36．4％和34．1％，具有信号转导活性的占11．4％；其中角蛋白8、18和vimentin等为内皮细胞特异表达的蛋白质。结论：本研究建立了nanoLC—ESI／MS／MS分析ECV304细胞的蛋白质组学方法，为内皮细胞及内皮细胞损伤机制的蛋白质组学研究奠定了实验基础。