Human αl-antitrypsin: molecular diagnosis of mutation and animal models of human pathology.

Un gene mutato per ľα1-antitripsina (α1AT) umana e stato isolato ed analizzato a livello molecolare. La mutazione induce bassi livelli plasmatici della proteina ed una importante patologia polmonare ed epatica. Ľallele mutato considerato (allele Z) presenta due mutazioni puntiformi: una e a livello del V esune del gene e si ritrova in tutti i soggetti carenti, ľaltra e nel III esone ed e presente sia nei soggetti carenti che nel 23% dei soggetti normali. Per identificare sui genoma totale il gene delľα1AT abbiamo sintetizzato quattro oligonucleotidi, complementari a sequenze fiancheggianti le due mutazioni, che funzionano da primer per una particolare DNA polimerasi termoresistente. Il III esone amplificato e stato digerito con ľenzima di restrizione BstEII il cui sito, normalmente presente, viene soppresso dalla mutazione. I due esoni amplificati sono stati quindi sequenziari e inseriti separatamente in un vettore plasmidico. I nostri risultati permettono: a) la diagnosi molecolare di mutazione e la diagnosi prenatale dei feti a rischio; b) la costruzione di geni anomali utilizzabili nella costruzione di animali transgenici.