pB2 R-Venus 重组真核载体的构建及在 HEK293T细胞中的表达

目的：构建带有黄色荧光蛋白突变体 Venus标签的人缓激肽2型受体（bradykinin receptor 2， B2R）真核表达载体，用于B2R与相关受体及蛋白的相互作用、B2R受体介导的信号转导机制的研究等。方法根据人B2R基因序列设计引物，以质粒pcDNA3．1-B2R为模板，PCR扩增目的基因人B2R。EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切扩增产物及质粒pVenus-N1，经回收、连接、转化，获取重组质粒。对重组质粒进行酶切、测序鉴定。转染重组质粒至 HEK293T细胞，荧光显微镜观察受体B2R的细胞定位，蛋白印迹法检测目的蛋白人B2R蛋白的表达。结果 PCR扩增出了1条长度为1176 bp的基因片段，测序结果与GenBank （AY275465）相同。荧光显示B2R表达于质膜。Western blot结果显示，实验组蛋白印迹条带与目的蛋白大小相同，为44kDa。结论成功构建了pB2R-Venus重组真核表达载体，瞬时转染成功，获得了转染有重组质粒的HEK293T细胞。成功构建的重组质粒pB2R-Venus可用于后续BRET、FRET等实验研究，有助于B2R介导的信号转导机制的探讨和药物靶点的寻找。