Validación de un método cromatográfico para la determinación de vitamina A en muestras de leche / Validation of a chromatographic method for the determination of vitamin A in milk samples

El objetivo de este trabajo fue validar un metodo para la determinacion de vitamina A en leche en polvo. Se utilizaron tres marcas de leche en polvo de distribucion masiva en la ciudad de Maracaibo, estado Zulia. Se realizaron ensayos para determinar las condiciones de extraccion y del sistema cromatografico. En el proceso de extraccion se fijo el tiempo de calentamiento de la muestra en 40 min. El contenido de vitamina A, se determino utilizando un equipo de Cromatografia Liquida de Alta Resolucion (HPLC) con una columna C18 y un detector de UV-visible. La longitud de onda se fijo en 300 nm y el flujo de la fase movil en 1,2 mL/min. Para la evaluacion estadistica de los resultados se utilizo el programa SPSS version 20.0. La selectividad del metodo se verifico empleando pruebas de degradacion artificial (termolisis, oxidacion y fotolisis) que permitieron observar los productos de degradacion de la vitamina A en los cromatogramas. Se prepararon ocho estandares de vitamina A, para elaborar una curva de calibracion que arrojo un coeficiente de correlacion de 0,991. Para la repetibilidad del metodo se obtuvo una Desviacion Estandar Relativa (RSD) de 1,37% y para la reproducibilidad una RSD de 1,33%. Se obtuvo un limite de deteccion (LOD) de 2,12 ppm y un limite de cuantificacion (LOQ) de 5,54 ppm. El tiempo de retencion de la vitamina A fue de 2,4 ± 0,15min. El metodo estudiado resulto ser preciso, selectivo y exacto. Se encontro que el contenido de vitamina A de las tres marcas de leche estudiadas esta por debajo del valor establecido por la Norma Venezolana COVENIN 1481:2001. Abstract The present study aimed to determine vitamin A in three brands of powder milk of high consumption in Maracaibo city, using High Performance Liquid Chromatography (HPLC) with a C18 column and UV-visible detector. It was necessary to change extraction method in order to improve the chromatograms obtained (heating time, wavelength, mobile phase flow rate, among others). For statistical analysis were used STATGRAPHICS Plus 3.1. The selectivity was verified using artificial degradation tests (thermolysis, oxidation and photolysis) that allowed us to observe the degradation products of vitamin A in the chromatograms. Eight standards were prepared to develop the calibration curve, which correlation coefficient was 0.991. The repeatability of the method indicated a RSD of 1,37% and a reproducibility of 1,33%. The detection limit and the quantification limit and the results were 2,12ppm and 5,54ppm respectively. The studied method is precise, selective and accurate. The retention timeof Vitamin A was 2,4 ± 0,15. The Vitamin A among determined in the three brands of power milk is lower than the established by the Venezuelan norm COVENIN 1481:2001.