含O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的羊痘病毒弱毒株转移载体的构建

利用已构建的口蹄疫病毒O／China99毒株的pMD18-T-P1-2A-3C载体和P—EGFP—Ni—P7．5载体，分别通过HindⅢ、Nhe Ⅰ酶切，将基因刚-2A-3C连接到线性载体P-EGFP—N1-P7．5，构建了载体P—EGFP—N1-P7．5-P1-2A-3C。将EGFP—P7．5-P1-2A-3C基因整体通过平末端连接到KpnI酶切后的载体pUC119-TK中，得到重组载体pUC119-TK—EGFP—P7．5-P1—2A-3C。通过PCR扩增、酶切鉴定及序列测定。结果表明，成功构建了一侧启动表达P1-2A-3C基因，一侧启动表达标记基因EGFP的pUC119-TK—EGFP—P7．5-P1-2A-3C转移载体。