Détection de Vibrio cholerae dans un écosystème marin par hybridation moléculaire après culture sur un milieu sélectif

Une technique moleculaire d'hybridation sur colonies bacteriennes a ete developpee pour rechercher les souches de Vibrio cholerae dans l'eau de l'estuaire de la Rance. Une sequence de 22 nucleotides selectionnee a l'extremite de la region 16S de l'espace intergenique 16S-23S de l'ADN de V. cholerae a ete marquee a la digoxygenine (DIG). La specificite et la sensibilite de la sonde ont ete demontrees d'une part par hybridation avec des souches de V. cholerae provenant de la Collection de l'Institut Pasteur et de la collection du Centre National de Reference des Vibrions et du Cholera, d'autre part par l'absence d'hybridation avec des souches appartenant a 31 autres especes du genre Vibrio et a 5 autres genres bacteriens. L'hybridation sur colonies permet une detection specifique de V. cholerae dans des echantillons d'eau parmi une population microbienne heterogene, apres enrichissement puis isolement sur milieux selectifs, la gelose TCBS classiquement utilisee pour la recherche des vibrions ou un milieu mANA, non inhibiteur mais favorisant la croissance de cette espece. Elle permet aussi de detecter V. cholerae apres etalement direct de l'echantillon d'eau sur le milieu GNAm, sans etape prealable d'enrichissement, ce qui ameliore la sensibilite de la detection de V. cholerae d'un facteur 10. Cette methode pourrait s'appliquer a la surveillance microbiologique de l'environnement marin et des produits qui en sont issus.