Expresión heteróloga de la proteína mayor de la cápsida (L1) del virus del papiloma humano tipo 18: purificación y caracterización de las proteínas recombinantes y partículas similares al virus (VLPS)

La infeccion con el virus del papiloma humano (VPH) es la ETS mas comun en mujeres. Un tercio de los VPH mucosotropicos, denominados de alto riesgo, estan relacionados con el cancer de cervix, siendo el tipo 18 el segundo mas. El 60% de las mujeres infectadas sufriran seroconversion con anticuerpos neutralizantes dirigidos a epitopos conformacionales de la proteina mayoritaria de la capsida (L1). Si bien los titulos de anticuerpos tras la infeccion natural son bajos, los adquiridos tras la vacunacion son 40 a 100 veces superiores. La produccion de antigenos de VPH es necesaria para estudiar la respuesta humoral frente a la infeccion natural asi como en poblacion vacunada, dado que se desconoce la duracion de la proteccion conferida por la vacunacion. El objetivo del trabajo fue la produccion la proteina L1 de VPH18 como proteina recombinante en Escherichia coli, en un sistema basado en la levadura metilotrofica Pichia pastoris y en celulas de insecto empleando baculovirus recombinantes. En E. coli la expresion se realizo como proteinas de fusion con GST observandose la formacion de cuerpos de inclusion. El tratamiento con lisozima, agentes reductores y detergentes durante la lisis y/o solubilizacion de la fraccion insoluble, incremento su recuperacion. La purificacion cromatografica combinada con elucion en PBS/urea, permitio eliminar proteinas bacterianas coprecipitantes. La proteina GST-ΔN7118L1 fue reconocida en Westernblot y ELISA por sueros comerciales y humanos de infeccion natural. En P. pastoris se detecto transcripcion especifica de las proteinas a niveles basales no inducibles por metanol, pero no traduccion, planteandose la existencia de problemas relacionados con terminacion prematura de la transcripcion. Finalmente se purificaron VLPs de VPH18 en celulas de insecto empleando baculovirus recombinantes, previo estudio de la cinetica de expresion de la proteina en este sistema, que pusieron de manifiesto los parametros optimos para la produccion y purificacion de VLPs.