Etude de l'activité galactolipase des lipases pancréatiques apparentées de type 2 (PLRP2)

La famille des lipases pancreatiques est constituee de trois sous-familles : la lipase pancreatique classique (PL) et les lipases pancreatiques apparentees de type 1 et 2 (PLRP1 et PLRP2). Contrairement a la PL, qui est active seulement sur les triglycerides, la PLRP2 possede trois types d’activites enzymatiques : lipase, phospholipase de type A1 et surtout galactolipase. Cette derniere activite est particulierement interessante car les galactolipides, principalement les monogalactosyldiacylglycerols (MGDG) et les digalactosyldiacylglycerols (DGDG) sont les lipides les plus abondants dans la nature. Un test continu, specifique et fiable de dosage de l’activite galactolipase a ete mis au point en utilisant la technique du pH-stat et un galactolipide synthetique a chaine moyenne comme substrat, le MGDG en C8. Ce nouveau test de dosage nous a permis de mesurer pour la premiere fois des activites specifiques importantes avec les PLRP2 humaine (HPLRP2) et du cobaye (GPLRP2) (1786±100 et 5420±85 U/mg, respectivement). Nous avons par la suite utilise cette meme technique pour etudier l’hydrolyse par les PLRP2 des galactolipides naturels a chaines longues purifies a partir de feuilles d’epinard. Les activites specifiques mesurees sont du meme ordre de grandeur que celles mesurees avec le MGDG en C8 mais aussi le DGDG en C8 synthetique, montrant ainsi que l’activite galactolipase n’est affectee ni par la longueur de la chaine acyle ni par la presence d’un ou de deux residus galactoses. Grâce a ce test nous avons pu realiser un criblage de lipases microbiennes de differentes origines a la recherche d’activites galactolipase. Dans une deuxieme partie, nous avons etudie les proprietes physico-chimiques du bis-monoacylglycerol-phopshate (BMP). Nous avons montre que non seulement ce phospholipide rare est hydrolyse par la PLRP2, mais le BMP et la PLRP2 humaine peuvent etre trouves dans la meme cellule, le monocyte, suggerant un nouveau role physiologique pour la PLRP2.