载血管紧张素转换酶短发卡RNA-聚乙二醇-壳聚糖纳米粒制备以及生物学特性

目的制备载血管紧张素转换酶（ACE）短发卡RNA（sh RNA）壳聚糖纳米粒,并且给予聚乙二醇（PEG）表面修饰,分析其相关物理学、生物学特性,以期获得一种缓释的非病毒载体介导系统。方法应用本实验室前期实验中筛选出的能显著下调ACE基因的靶序列,采用菌液用碱裂解法大量抽提和纯化重组质粒,随机酶切测序,并检测质粒浓度与纯度,采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒,PEG修饰壳聚糖纳米粒,复凝聚法制备不同p H值、体积比以及PEG化的载ACEsh RNA壳聚糖纳米。喷金电镜下对各种壳聚糖纳米粒悬液扫描并照相,观察纳米粒与形态。应用凝胶阻滞分析验证载ACEsh RNA壳聚糖纳米多聚复合物的形成及电荷性质。结果1壳聚糖纳米粒的粒径随着溶液p H值的升高而增大,当p H值为5.5时的PEG壳聚糖纳米粒平均粒径（125.8±5.6）nm左右,大小均匀,多分散度最小,分布比较集中,zeta电位为正,有利于与带负电荷的质粒结合;PEG化后也对粒径以及zeta电位无明显影响,但是与壳聚糖相同条件相比,分散度均明显减小,可见更适合制备均匀的纳米粒,利于和质粒结合;壳聚糖与质粒体积比（质量比）为1∶1制备的壳聚糖纳米粒平均粒径较小,故通过细胞膜的通透性较好,多分散度较小,分布比较集中,zeta电位也为正值,有利于与带负电荷的质粒结合。2壳聚糖纳米以及PEG化壳聚糖纳米质粒复合物均有效结合质粒,由于中和了质粒所带的负电荷,凝胶电泳时,质粒不出孔,而裸质粒则出孔;p H〈7时壳聚糖分子中大部分的氨基带正电荷能与质粒DNA有效地结合,质粒不出孔;在体积比为1∶1、1∶2、1∶3时,壳聚糖纳米粒能有效地结合质粒。结论所制备的载ACE sh RNA-PEG壳聚糖纳米粒大小均匀,粒径分布范围较窄,并且筛选出在p H=5.5时,与质粒体积比为1∶1时,以PEG壳聚糖纳米粒作为载体有良好的结合力,为后期体外转