PADRONIZAÇÃO DO MÉTODO DE ELISA INDIRETO PARA A DETECÇÃO DE PROTEÍNAS BACTERIANAS DE Photobacterium damselae subsp. piscicida

A bacteria Photobacterium damselae subsp. piscicida (Phdp) e um importante patogeno que infecta peixes marinhos e outros organismos aquaticos. O mecanismo de virulencia esta associado a capsula de polissacarideos que bloqueia a acao dos reativos intermediarios do oxigenio (ROIs) reduzindo a atividade fagocitica. E a liberacao de uma exotoxina caracterizada como proteina de inducao a apoptose (AIP56), que ativa o mecanismo apoptotico em fagocitos, e ambos os mecanismo interagem em sinergismo, proporcionando a sobrevivencia do microrganismo e sua evolucao para o estagio cronico da doenca. Devido a importância deste patogeno, metodos confiaveis de diagnosticos se fazem necessarios, para a identificacao e posterior terapeutica da doenca. Desta maneira, o presente estudo produziu IgY extraidas da gema do ovo de galinhas poedeiras, especificas para proteinas bacterianas de Phdp. E as IgY foram testadas para o ensaio de ELISA indireto em bloco, variando a concentracao das proteinas microbianas e da IgY, entre 5, 10, 15 e 20 µg/mL. A concentracao de 5 µg/mL de IgY, em um volume de 100 µL, foi eficaz para detectar as quatro concentracoes de ambas as fracoes proteicas microbianas estudas. Apresentando, sensibilidade e especificidade para distinguir entre proteinas presentes na parede celular, membrana e no citoplasma de celulas bacterianas de Phdp, possibilitando a aplicacao da IgY no ensaio de ELISA indireto como biomarcadora para o diagnostico da enfermidade microbiana