耐热β-半乳糖苷酶(Pyrococcus furiosus DSM 3638)活性位点N415S点突变对其酶活性的影响

β-半乳糖苷酶具有将乳糖分解为半乳糖和葡萄糖的能力，也具有把半乳糖聚合成低聚半乳糖的能力。这两种能力在工业生产中具有不同的意义。通过点突变使β-galactosidase[ Pyrococcus furiosus DSM 3638]415位天冬酰胺(Asn or N)突变为丝氨酸(Ser or S)，突变体构建于毕赤酵母表达质粒载体，并筛选以毕赤酵母为宿主细胞的工程菌种，以此制备β-半乳糖苷酶的突变体酶蛋白。研究发现，该突变体的β-半乳糖苷酶活性在95 ℃、pH5.5时达到最高酶活，为耐高温乳糖酶，且该突变体水解牛奶的能力较好，可用于低乳糖牛奶及其相关制品加工中。而突变后β-半乳糖苷酶的另一个活性，即产生低聚半乳糖的能力的活性也有所提高，但不够明显。因此该位点突变可用于乳制品的加工，但不能期盼产生更多的半乳糖寡聚体。