MAIOR EFICIÊNCIA NO ISOLAMENTO DE ORGANISMOS FITOPLANCTÔNICOS PELA ASSOCIAÇÃO DOS MÉTODOS DE DILUIÇÃO EM SÉRIE E PLAQUEAMENTO EM MEIO SEMI-SÓLIDO

Dentre as tecnicas tradicionalmente utilizadas no isolamento de organismos do fitoplâncton, a diluicao em serie e uma das mais difundidas. Entretanto, grande parte das culturas obtidas por este metodo nao sao unialgais e necessitam ser purificadas. O plaqueamento em meio solido e uma das tecnicas mais simples e baratas para o isolamento, porem, nem todos os organismos sao capazes de crescer nessas condicoes, especialmente celulas sem parede celular que tendem a se romper quando em contato com o ar. Tal problema pode ser contornado se o plaqueamento for integrado, ou seja, se a agua do mar natural (amostra) for incluida junto a um meio semi-solido antes de ser vertida na placa de Petri. A associacao da diluicao em serie ao plaqueamento em meio semi-solido, proposta no presente estudo, e interessante porque o crescimento dos clones de microalgas ocorre de maneira separada espacialmente, facilitando o isolamento dos organismos. O meio de cultura semi-solido foi preparado utilizando agar e agua destilada, esterelizados por calor umido e mantidos em estufa a 43°C (Ukeles,1976). O meio de cultura Erd-Schreiber foi mantido sob a mesma temperatura. Imediatamente antes da inoculacao da agua do mar natural (coletada em Ubatuba-SP), os meios foram levados a temperatura ambiente e a solucao de agar foi adicionada ao meio Erd-Schreiber a uma concentracao final de 1% de agar. Foram realizadas tres series de diluicoes: 1/10, 1/100 e 1/1000 (agua do mar natural/ meio semi-solido), em triplicatas. As placas foram mantidas por 20 dias em temperatura ambiente, sob irradiância de 80 mE m -2 s -1 .Posteriormente, os clones foram transferidos para tubos contendo meio de cultura liquido. No total, 24 cepas (todas menores de 15μm) foram isoladas, com representantes das classes: Cryptophyceae ( Hemiselmis sp.), Crysophyceae ( Ochromonas sp.), e especies nao identificadas das classes Bacillariophyceae, Chlorophyceae, Prasinophyceae e Cyanophyceae. Portanto, este procedimento demonstrou ser pouco seletivo, permitindo o isolamento de organismos frageis, evidenciando que a associacao dos metodos proposta e mais eficiente que o uso das tecnicas tradicionais aplicadas separadamente.