Detection of human/goat xenogeneic models by interphase fluorescence in situ hybridization

目的建立一种高度灵敏特异的间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization, IFISH)技术,以检测人/山羊嵌合模型中低比例的人细胞.方法采用人特异Y染色体卫星DNA探针CEPY和17号染色体卫星DNA探针p17H8对两头移植人男性造血干细胞(hematopoietic stem cell, HSC)的人/山羊嵌合模型、1头正常阴性山羊和1名正常人男性的外周血进行IFISH分析.为评价FISH检测效率的正确性,将正常人男性与正常阴性山羊细胞按1/100、1/500和1/1000混合进行IFISH分析.并确定一套信号计数规则,以保证方法稳定可靠.结果人/山羊混合细胞中人细胞阳性率与原比例相近.人细胞阳性率平均值为正常人男性98.60%(CEPY)和100.00%(p17H8)、正常阴性山羊为0、人/山羊嵌合模型为0.23%(CEPY)和0.11%(p17H8).结果表明人/山羊嵌合模型中有低比例的人细胞存在,且为男性细胞.结论本研究建立的IFISH技术高度灵敏特异,能真实反映检测细胞的比例,为人/山羊嵌合模型中低比例的人细胞检测提供了直观、灵敏、特异的途径.