Orai2参与了HUVEC外钙敏感受体介导的Ca^2＋内流和NO生成

目的 研究钙释放激活的钙调素2（Orai2）在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）细胞外钙敏感受体（CaR）介导Ca2＋内流和一氧化氮（NO）生成中的作用.方法 1）用转染技术将构建的Orai2干扰质粒（Orai2shRNA）转染人HUVEC,用实时定量RT-PCR和Western blot检测Orai2 mRNA和蛋白的表达.2）取2～5代HUVEC,分别以精胺激活CaR（钙池操纵性钙通道（SOC）和受体操纵性钙通道（ROC）均激活）、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13（TPA） ＋CaR负性变构调节剂Calhex231（激活ROC及阻断SOC）、蛋白激酶C（PKC）抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967（阻断ROC及激活SOC）为细胞模型.实验分为3组：特异性质粒转染组（Orai2shRNA组）,未转染组（空白对照组）,空质粒组（vehicle组）,用荧光探针Fura-2/AM、DAF-FM负载方法同步检测[Ca2＋]i和NO的生成.结果 1）与control组相比,shOrai2-71干扰后,Orai2 mRNA和蛋白的表达均明显降低,抑制率分别为75.75％和70.58％ （P ＜0.05）.2）与对照组和空质粒组相比,在4种不同处理因素作用下,Orai2shRNA转染组[Ca2＋]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低（P＜0.05）.结论 Orai2参与了HUVEC中CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2＋内流和NO生成.