015 Optimisation du transfert de gènes au niveau des cellules ARPE in vitro dans le cadre de modèles de rejet immun

Introduction Le transfert de genes est une approche seduisante pour outrepasser les limitations a la transplantation de cellules de l’epithelium pigmentaire retinien (RPE). Nous proposons ici d’investiguer l’efficacite de differents serotypes de virus adeno-associes (AAV) ainsi que leurs promoteurs sur l’infection de cellules de RPE en culture (ARPE). Nous avons ensuite evalue la capacite de ces approches de transfert de gene afin de diminuer l’immunogenicite des cellules RPE par transfert du gene anti-inflammatoire SOCS1 in vitro . Materiels et Methodes Des cellules ARPE ont ete infectees in vitro par AAV serotype 1, 2, et 5 contenant le gene eGFP sous le controle d’un promoteur CMV, CAG, ou Tet-inductible. La fluorescence a ete mesuree par cytometrie de flux (FACS). Les cellules ARPE furent egalement infectees par un AAV2-CAG-SOCS1 avant d’etre stimulees par interferon gamma (IFNg). L’expression de SOCS1 a ete analysee par RTPCR tandis que l’expression du complexe majeur d’histocompatibilite de classe II (MHCII) a ete mesuree par FACS. Resultats Nous avons montre que l’AAV2 permettait d’infecter jusqu’a 85 % des cellules ARPE, ce qui etait 2 a 3 fois superieur aux autres. L’intensite de fluorescence moyenne etait nettement superieure avec le promoteur CMV qu’avec le CAG ou le Tet- ON. Cependant, le promoteur CAG permettait une expression du trangene plus stable avec le temps. L’infection par AAV2-CAG-SOCS1 permet une expression de SOCS1 au niveau cellulaire et une inhibition de l’expression de MHCII mediee par IFNg. Discussion L’AAV2 est le meilleur serotype pour infecter les cellules ARPE in vitro . Le promoteur CMV est le plus efficace en vue d’obtenir une expression forte tandis que le promoteur CAG permet une expression stable dans le temps. Le transfert du gene SOCS1 medie par AAV2 dans les cellules ARPE resulte en une expression mesurable de la proteine SOCS1 ainsi qu’une diminution du MHCII apres stimulation par IFNg. Conclusion Les modeles de rejet immun, quel que soit le type cellulaire investigue, repose principalement sur une balance de l’expression des MHC de type I et II. Une diminution de l’expression du MHCII au niveau de cellules RPE avant leur transplantation dans l’espace sous-retinien pourrait permettre de reduire le rejet immun dans le cadre de pathologies telles que la DMLA.