تاثیر دما بر جنینزایی میکروسپور و باززایی گیاهان دابلد هاپلوئید در سه هیبرید کلزا (Brassica napus L.)

در این پژوهش، مراحل مختلف کشت میکروسپور (اعم از جنین‌زایی و باززایی) جهت تولید گیاهان دابلد‌هاپلوئید کلزا ( Brassica napus L. ) مورد بررسی قرار گرفت. هیبریدهای RGS003 ´ ARC5 ، Hyola 401 و Hyola 420 به عنوان مواد گیاهی مورد استفاده قرار گرفتند. میکروسپورها در مرحله تکوینی انتهای تک‌سلولی تا ابتدای دو‌سلولی از غنچه‌هایی به طول 5/2 تا 5/3 میلی‌متر جدا شدند و در محیط کشت NLN-13 حاوی 13 درصد ساکارز کشت شدند و سپس تحت تنش‌های حرارتی C ° 37 به مدت 8 ساعت، C ° 35 به مدت18 ساعت، C ° 32 به مدت 72 ساعت و C ° 30 به مدت10 و14روز قرار گرفتند. هیبریدهای مورد استفاده تنها در 30 درجه سانتی‌گراد به مدت 10 و 14 روز تولید جنین رویشی کردند، هر چند تیمار ° C 30 به مدت 14 روز جنین‌زایی و باززایی بهتری نشان داد. بهترین روش برای غلبه بر جنین‌زایی ثانویه، انتقال جنین‌های لپه‌ای شکل به محیط B5 حاوی اسید جیبرلیک ( mgl-1 01/0) و نگهداری در دمای 4 درجه سانتی‌گراد و تاریکی به مدت10 روز و سپس انتقال به روشنایی و دمای 25 درجه سانتی‌گراد تعیین شد. بعد از رشد، جنین‌ها به محیط B5 بدون اسید جیبرلیک جهت باززایی انتقال یافتند. گیاهان هاپلوئید به منظور افزایش سطح پلوئیدی با محلول کلشیسین (34/0 درصد) به مدت 5/1 ساعت تیمار شدند. گیاهان دابلد هاپلوئید از هر سه ژنوتیپ مورد بررسی، تولید بذر کردند.