HSV—TK与IL-2共表达真核载体的构建及其在A549细胞中的表达
2009
目的构建含有自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和人类细胞因子白细胞介素-2(IL-2)的联合表达质粒载体并观察其在人类肺腺癌细胞系A549细胞中的表达。方法设计、合成多克隆位点(MCS)插入到质粒pSNAV中,然后分别从其他不同的质粒剪切片段HSV-TK、内部核糖体进入位点(IRES)、IL-2并依次接入到MCS中,最终得到目的质粒pSNAV-TK-IRES-IL2(pMT1I)。目的质粒经酶切、DNA测序鉴定正确后,转染到A549细胞中。用RT-PCR方法、ELISA法检测转染后细胞目的基因的转录和表达;进一步倒置显微镜观察、MTT法检测更昔洛(GCV)对转然后细胞的杀伤作用。结果经酶切、DNA测序、RT-PCR法和ELISA法鉴定,双基因真核表达载体pMTII序列正确并能有效表达。进一步倒置显微镜观察和MTT法检测表明HSV—TK/GCV自杀基因系统对A549细胞有明显的杀伤作用。结论成功构建了pMTⅡ真核表达载体,并观察了其对A549细胞的杀伤效应,为进一步研究HSV-TR/GCV联合IL-2基因治疗肺癌提供实验基础。
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