HSV—TK与IL-2共表达真核载体的构建及其在A549细胞中的表达

目的构建含有自杀基因单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）和人类细胞因子白细胞介素-2（IL-2）的联合表达质粒载体并观察其在人类肺腺癌细胞系A549细胞中的表达。方法设计、合成多克隆位点（MCS）插入到质粒pSNAV中，然后分别从其他不同的质粒剪切片段HSV-TK、内部核糖体进入位点（IRES）、IL-2并依次接入到MCS中，最终得到目的质粒pSNAV-TK-IRES-IL2（pMT1I）。目的质粒经酶切、DNA测序鉴定正确后，转染到A549细胞中。用RT-PCR方法、ELISA法检测转染后细胞目的基因的转录和表达；进一步倒置显微镜观察、MTT法检测更昔洛（GCV）对转然后细胞的杀伤作用。结果经酶切、DNA测序、RT-PCR法和ELISA法鉴定，双基因真核表达载体pMTII序列正确并能有效表达。进一步倒置显微镜观察和MTT法检测表明HSV—TK／GCV自杀基因系统对A549细胞有明显的杀伤作用。结论成功构建了pMTⅡ真核表达载体，并观察了其对A549细胞的杀伤效应，为进一步研究HSV-TR／GCV联合IL-2基因治疗肺癌提供实验基础。