Obtención, purificación y evaluación de inmunoglobulina Y (IgY) específicas con fines diagnósticos y terapéuticos

La hiperinmunizacion de gallinas con vistas a obtener IgY especificas contra enfermedades de otras especies es un metodo altamente eficiente, no estresante ni invasivo para las mismas. Permite generar grandes cantidades de anticuerpos especificos, los cuales se pueden aislar, purificar y cuantificar por metodos relativamente simples y economicos. Estos anticuerpos especificos pueden ser usados para brindar inmunidad pasiva, instaurar tratamientos, como aditivo alimenticio en reemplazo de antibioticos promotores de crecimiento o para diagnostico. Esta ultima aplicacion es de gran valor debido la alta especificidad brindada por la amplia distancia filogenetica entre las especies involucradas, implica una alta confiabilidad de los resultados y disminuye notablemente la aparicion de falsos negativos. En este proyecto se evaluaron diferentes metodos de extraccion, purificacion y cuantificacion de IgY especificas para el modelo de caracterizacion y aplicacion de las IgY contra Lawsonia intracellularis. Para la extraccion de las IgY se selecciono el metodo de deslipidacion mediante la tecnica de precipitacion con polietilenglicol. El contenido de proteina de las muestras obtenidas se mide fotometricamente a 280 nm con un coeficiente de extincion de 1,33 para IgY. Posteriormente se determina la concentracion de IgY especificas contra Lawsonia intracellularis mediante ELISA utilizando anti IgY producida en conejo marcada con peroxidasa. El grado de pureza y recuperacion de las IgY se realiza mediante SDS-PAGE, con geles T 4-20% coloreados con Coomasie Blue permitiendo la visualizacion de las IgY como una unica banda de 180.000 Da. En este proyecto se ha seleccionado Lawsonia intracellularis como antigeno inductor de inmunidad, debido a las perdidas economicas que provoca en la actualidad la Enteropatia Proliferativa Porcina. El modelo de obtencion de anticuerpos propuesto en este proyecto evita el empleo de equinos hiperinmunizados, los cuales deben someterse a continuas extracciones de sangre para obtener los anticuerpos. Desde el punto de vista del bienestar animal este proceso es beneficioso, ya que las gallinas trasmiten la inmunidad a traves de un proceso natural como es la postura, haciendo innecesario el empleo de equinos para obtencion de suero. Otras ventajas del modelo seleccionado en este proyecto son; a) las aves producen en corto tiempo mayor cantidad de anticuerpos a las obtenidas por el metodo tradicional de hiperinmunizacion y sangrado de equinos. b) la extraccion de los anticuerpos no se realiza por puncion, ya que las aves ponen el huevo naturalmente y no deben ser obtenidos por tecnicas invasivas. c) los metodos de extraccion, purificacion y evaluacion de IgY son relativamente simples y tienen un costo razonable. d) el equipamiento necesario es accesible y puede ser operado por personal entrenado sin dificultad, lo cual hace posible que estos desarrollos puedan llevarse a cabo en laboratorio de mediana complejidad. e) la obtencion de anticuerpos por este metodo reduce sensiblemente los costos de produccion versus los metodos tradicionales de fabricacion de anticuerpos policlonales. f) el costo de mantenimiento y el espacio que se debe dedicar para alojar las aves es notablemente inferior a la necesaria para mantener equinos, lo que redunda en una optimizacion de los costos de produccion.