Relación estructura-función de la proteína epididimaria de rata "DE", y su potencial uso para el desarrollo de un método de regulación de la fertilidad

La glicoproteina epididimaria de rata "DE" se asocia al espermatozoide durante la maduracion, y participa en el proceso de fusion de gametas a traves de sitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. Con el fin de comprender los mecanismos involucrados en la participacion de DE en dicho proceso, se estudio la importancia de la estructura de DE para la actividad de la proteina. El clonado del ADNc de DE permitio obtener la secuencia de los 227 aminoacidos (aa) de la proteina. El analisis de dicha secuencia indico que DE pertenece a la familia CRISP (cystein rich secretory proteins), y la presencia de 16 cisteinas en la molecula. El ADNc fue utilizado luego para expresar la proteina recombinante en bacterias (recDE). El estudio de recDE y de la proteina nativa deglicosilada, indico que la actividad biologica residiria en la porcion peptidica de la molecula. Por otro lado, el analisis del estado de oxidacion de las cisteinas indico que la mayoria de ellas formaria puentes disulfuro, y que la ruptura de los mismos afectaria la actividad de la proteina. La expresion de distintos fragmentos recombinantes de DE y su empleo en ensayos biologicos, revelo que la actividad de la proteina residiria en la region comprendida entre los aa 62-158. Resultados previos de nuestro laboratorio indican que la inmunizacion de ratas con proteina DE produce una respuesta inmune y una inhibicion significativa de la fertilidad. El presente trabajo indica que los mecanismos responsables de dicha inhibicion involucrarian la entrada de anticuerpos anti-DE al tracto reproductivo, su interaccion con los espermatozoides, y la disminucion de la capacidad fertilizante de los mismos, abriendo la posibilidad del potencial uso de DE para el desarrollo de un metodo inmunologico de regulacion de la fertilidad. Dado que para ello es necesario poder disponer del antigeno en grandes cantidades, la proteina recombinante fue utilizada en ensayos de inmunizacion, que indicaron que recDE, al igual que la proteina nativa, es capaz de producir una respuesta inmune y una reduccion de la fertilidad. Con el fin de investigar la posible aplicacion de este metodo inmunologico en el hombre, la capacidad inmunogenica de la proteina humana homologa a DE, proteina ARP, fue estudiada en un modelo de primates no humanos, observandose la induccion de una elevada respuesta inmune en los animales inmunizados. En conjunto, los resultados obtenidos en este trabajo contribuyen al esclarecimiento de los mecanismos involucrados en la participacion de DE en el proceso de fusion de gametas, y apoyan el potencial uso de esta proteina y sus homologos para el desarrollo de un metodo inmunologicode regulacion de la fertilidad tanto en animales como en el hombre.