Estudio de tres técnicas de concentración de proteína para la determinación del perfil proteico en Condensado de Aire Exhalado

El condensado de aire exhalado (CAE) es una muestra pulmonar que se toma de forma rapida, no invasiva y que resulta atractivo para encontrar biomarcadores especificos de enfermedad. Hasta la fecha, los analisis en CAE se centraron en mediciones de pH, estres oxidativo o deteccion de biomarcadores preseleccionados en base a la bibliografia. Solo un pequeno porcentaje intento sin exito la determinacion de proteinas mediante espectrometria de masas. Nuestra hipotesis es que el concentrado inicial del CAE es un paso critico y por ello comparamos la eficacia de tres metodos: liofilizacion, centrifugacion y cromatografia de fase reversa. Recogimos muestras de CAE de voluntarios (n=20) con el dispositivo ECoScreen (Viasys GmbH, Alemania) y las almacenamos a -80oC hasta su procesamiento final. Cuantificamos la proteina con un kit basado en el Acido Bicinconinico (BCA). Realizamos la liofilizacion a temperatura ambiente y presion negativa. Para la centrifugacion empleamos los filtros Amicon Ultra-2 (Millipore). Realizamos la cromatrografia de fase reversa con la resina POROS R2 (Applied Biosystems). Identificamos los peptidos por espectrometria de masas (Maldi Tof-Tof).