Construction and expression of prokaryotic expression vector of mycobacterium tuberculosis rv3873 gene and its purification

目的 构建结核分枝杆菌(M.tb)rv3873基因原核表达载体并进行表达.方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增MTB rv3873基因,并克隆入pGEM(R)-T Easy质粒.测序正确后,再亚克隆入pET30a(+)质粒,构建pET30a(+):rv3873重组体.结果 以重组体分别转化DH5α和BL21(DE3)菌后,经0.4mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,pET30a(+):rv3873表达出相对分子质量为47 000左右的重组蛋白.SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4 h重组蛋白的表达量最高.表达蛋白以包涵体形式存在于胞质中,表达量占全菌蛋白质的50%,Western blot证实其具有良好的抗原性.经Ni-NTA柱纯化,获得纯度为90%的重组蛋白.结论 成功地构建原核表达载体pET30a(+):rv3873,并获得重组Rv3873蛋白,为辅助诊断结核菌的感染奠定了基础。