BB. Influência do efeito de compostos iônicos na atividade e estabilidade da L-asparaginase

Introducao: A estabilidade de proteinas e modulada por alteracoes estruturais, e pode ser alterada pela adicao de solventes. A perda da estabilidade pode levar alem da desnaturacao proteica, a perda de funcao. Recentemente, varios compostos ionicos tem se mostrado efetivos para manutencao da estabilidade nativa de proteinas, principalmente no que diz respeito a funcao biocatalitica. Dentre esses, os Liquidos Ionicos (LI) demonstram alto potencial, visto serem sais compostos por um cation orgânico e ânion orgânico/inorgânico, mas contrariamente aos sais comuns apresentam baixo ponto de fusao, geralmente por definicao<100oC. O grande numero de arranjos possiveis dos ions que os compoem, confere a estes uma serie de propriedades interessantes, como maior biocompatibilidade, alta solubilidade em agua, alta condutividade ionica e termica e elevada estabilidade quimica e termica. Essas propriedades mostram um grande potencial destes compostos para processos de extracao/purificacao de biomoleculas e biocatalise. Apesar do crescente numero de estudos acerca dos efeitos de LI sob a estabilidade de enzimas, ainda permanece escasso os que tratam de enzimas terapeuticas, como a L-asparaginase (ASNase), importante biofarmaco para o tratamento da Leucemia Linfoblastica Aguda Infantil. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a influencia de diferentes concentracoes de compostos ionicos derivados de colina (um sal, cloreto de colina ([Ch]Cl) e um LI, acetato de colina ([Ch][OAc])) sob a estabilidade e atividade da ASNase comercial. Metodologia: Foi avaliado o efeito de diferentes concentracoes do sal/LI, variando a fracao molar de 0,001 a 0,05 mol sal/LI /mol total . A estabilidade foi avaliada por meio da atividade enzimatica apos a pre-incubacao da solucao de ANSase a 0,05 mg/mL em tampao fosfato (pH 7,4) nas diferentes solucoes a 25°C, por 22 h. A atividade foi realizada pelo metodo de Nessler, e uma unidade (U) foi definida como a quantidade de enzima necessaria para liberar 1μmol de amonia/min. Resultados e discussao: O efeito da concentracao e tempo de contato a 25°C mostraram que ambos, sal e LI, aumentam a atividade de ASNase proporcionalmente ao incremento de sua concentracao. O aumento chegou a 2,8 vezes com [Ch]Cl e a 1,8 com [Ch][OAc] quando comparado a atividade da enzima em tampao, o que esta de acordo com a literatura. Embora tenha ocorrido um aumento da atividade final, em todas as condicoes estudadas ocorreu uma perda da atividade enzimatica ao longo do tempo de exposicao, tendo sido obtida uma estabilizacao da atividade enzimatica apos 6 h de exposicao. No entanto, mesmo com a perda de atividade observada, os valores finais de atividades da ASNase presente em solucoes com concentracoes de sal e LI foram sempre superiores em relacao a atividade em tampao. O [Ch]Cl mostrou-se mais eficiente no aumento da atividade. Conclusao: Ambos compostos ionicos promoveram o aumento da estabilidade e atividade enzimatica, sendo possiveis candidatos a serem utilizados como solventes biocompativeis para processos biocataliticos, ou como agentes extrativos em processos industriais de purificacao de biofarmacos.