Rev-erbβ 基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的 探讨核受体Rev-erbβ基因敲除对肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响。 方法 首先采用对靶向基因进行特定DNA修饰的CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建Rev-erbβ基因敲除的HepG2细胞系。用Rev-erbβ打靶载体共转染到HepG2细胞，通过筛选、克隆化构建Rev-erbβ基因敲除HepG2细胞系，并采用PCR、测序和Western blot鉴定。以正常HepG2细胞为对照，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Rev-erbβ基因敲除对肿瘤迁移、侵袭相关基因表达的影响，采用MTT、细胞划痕、Transwell等实验检测Rev-erbβ基因敲除对HepG2细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 结果 成功构建一株Rev-erbβ基因完全敲除单克隆细胞系(经PCR、测序和Western blot鉴定)，命名为HepG2 C5(Rev-erbβ-/-)。qRT-PCR结果显示，Rev-erbβ基因敲除可以导致基质金属蛋白酶-2，-9基因(MMP2，MMP9)、细胞外基质蛋白1基因(ECM1)表达上调(P均＜0.05)，细胞黏附相关基因E-钙黏蛋白基因(CDH1)下降(P=0.05)；MTT、细胞划痕、Transwell实验显示，并且HepG2 C5比对照细胞有更强的增殖、迁移与侵袭能力(P＜0.05)。 结论 Rev-erbβ基因敲除可以改变HepG2细胞与迁移、黏附相关基因的表达，进而影响HepG2细胞增殖、迁移与侵袭能力。