Transformation de lactobacillus plantarum par de l'adn plasmidique. Construction de vecteurs navettes et etude de leurs stabilites dans les souches transformees

Lactobacillus plantarum est une bacterie lactique utilisee industriellement comme culture starter dans les fermentations de produits carnes et dans les ensilages. C'est aussi une bacterie commensale des cavites naturelles de l'homme. Nous avons aborde la transformation de cette bacterie dans le but d'etudier la structure et l'expression de son genome. Des vecteurs navettes pulp ont ete construits a partir d'un plasmide cryptique de 2,1 kb (plp1) isole de l. Plantarum ccm 1904. Le plasmide plp1 a ete clone dans le plasmide puc19 pour permettre son amplification dans e. Coli. Un gene marqueur de la transformation s'exprimant dans les bacteries a gram#+ a ete insere dans les plasmides hybrides plp1-puc19. Le plasmide plp1 code pour une proteine de 37000 exprimee dans le contexte maxicells d'e. Coli. Cette proteine (rep) est indispensable a la replication des vecteurs pulp chez b. Subtilis et chez l. Plantarum. La proteine rep produite par le plasmide plp1 residant dans la bacterie, peut agir en trans sur la replication de plasmides pulp rep-deficients. Des phenomenes d'incompabilite et de recombinaison entre les plasmides residants et les plasmides vecteurs ont ete observes dans les souches transformees. La stabilite des plasmides a egalement ete etudiee. La transformation de l. Plantarum ccm 1904 par electroporation a ete optimisee par l'etude de divers parametres physiologiques et physiques, et une efficacite de 8?10##4 transformants par g d'adn plasmidique et par cellule viable a ete obtenue. La transformation de protoplastes par electroporation ou en presence de polyethylene glycol s'est revelee inefficace. Le protocole de transformation de cellules entieres a ete applique a d'autres souches de l. Plantarum