应用表达载体介导siRNA抑制乳腺癌细胞MCF-7血管内皮生长因子-C基因的表达

目的探讨表达载体介导小干扰RNA（siRNA）对人乳腺癌细胞系MCF-7血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达的抑制作用。方法设计合成一对编码后可形成小发夹结构针对VEGF-C基因的siRNA的DNA序列，将其连人pRNAT-U6.1／Neo质粒中，构建VEGF-CsiRNA表达载体。表达载体进行PCR及测序鉴定，并分别转染MCF-7细胞，半定量RT-PCR和免疫组织化学技术检测转染前后MCF-7细胞VEGF—C基因表达的变化。结果PCR和DNA测序证实，携带VEGF—CsiRNA表达载体构建成功，VEGF-C基因的mRNA和蛋白表达量与空质粒转染相比均明显下降（P〈O．05），在mRNA水平其表达抑制率为61．8％；在蛋白表达水平其表达抑制率为78．3％。结论本研究构建的VEGF-CsiRNA表达载体可有效抑制MCF-7细胞VEGF-C的mRNA和蛋白表达，为进一步以VEGF-C为靶点的乳腺癌治疗实验研究奠定了基础。