重组腺相关病毒-胸苷激酶-核糖体插入位点-内皮抑素双靶点基因治疗裸鼠膀胱癌的实验研究

目的探讨重组腺相关病毒（rAAV）-胸苷激酶（TK）-核糖体插入位点（IRES）-内皮抑素（ES）（简称rAAV-TIE）双靶点基因治疗膀胱癌的动物实验效果。方法膀胱癌T24细胞悬液接种于27只Balb／c裸鼠右侧肩胛区皮下，观察成瘤情况；取已成瘤裸鼠25只，随机分为对照组、rAAV-多克隆位点（MCS）组、rAAVTK组、rAAV—ES组、rAAV—TIE组，每组5只，瘤内分别注射生理盐水、rAAV—MCS、rAAVTK、rAAV—ES、rAAVTIE，4周后颈椎脱臼处死裸鼠，取出移植瘤，HE染色、计算微血管密度（MVD）；采集裸鼠血液标本，双夹心酶联免疫吸附试验检测血清中ES浓度。结果①T24细胞接种3周后，接种部位肿瘤形成25只，成瘤率93％；②瘤内注射rAAVES、rAAVTK、rAAV-TIE 9d后，肿瘤生长明显抑制。治疗4周后rAAV—ES、rAAVTK、rAAV-TIE、rAAVMCS和对照组肿瘤体积分别为（0．75±0．08）、（0．71±0．11）、（0．52±0．09）、（1．27±0．13）、（1．24±0．17）cm^3；rAAV—ES组与rAAV—TK组间比较差异无统计学意义，其余组间比较差异均有统计学意义（P值均〈O．05）；③5组裸鼠移植瘤MVD分别为（18．72±2．53）、（21．74±4．62）、（12．73±1．78）、（52．38±6．46）和（49．94±7．17）个／HP，治疗组显著低于空白对照组和空病毒组（P〈0．05）。结论重组rAAV—TIE腺相关病毒被成功构建，体外实验表明rAAV-TIE能抑制膀胱癌的血管生成和肿瘤生长，可有效双靶点基因治疗膀胱肿瘤。