微生物转谷氨酰胺酶（MTGase）的AOT反胶束纯化研究

研究微生物转谷氨酰胺酶（MTGase）反胶束纯化的工艺和条件，调节MTGase离心上清液等电点，除去部分杂蛋白，MTGase活力升高7．5倍；用截留分子量为10000的超滤膜除去小分子杂蛋白，MTGase活力升高1．33倍；用0．05mol／L的AOT／异辛烷反胶束进一步纯化MTGase，其最适萃取条件是粗MTGase蛋白质浓度20mg／mL，[Na^＋]0．12mol／L，水相pH4．80—5．20，相比1：1（v／v）；荷载MTGase的AOT反胶束用2．0mol／LKCl进行反萃取，MTGase活力为14．2U／g，纯化8．875倍；冷冻干燥脱盐反萃取液，获得MTGase冻干粉，其活力为110．3U／g，与粗酶液相比较，纯化689．4倍。经过AOT／异辛烷反胶束萃取纯化的MTGase，其SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为一条带。Ca^2＋与表面活性剂非极性尾上丁二酰羰基氧、极性头磺酸基硫氧基氧及MTGase分子表面具有孤电子对的基团的配位结合放大了AOT反胶束的另一种萃取作用——配位萃取，致使其对MTGase的萃取率高于K^＋而接近Na^＋。