Isolation, culture and functional evaluation of islets of langerhans

L'etape de digestion par la collagenase de l'isolement d'ilots est variable et imprevisible, du fait d'une part de la variabilite de la collagenase mais aussi des effets complexes du prelevement et du stockage du pancreas sur la digestion par la collagenase. L'amelioration de la purification des ilots par la centrifugation sur gradient ne resultera pas de la mise au point de nouveaux milieux pour le gradient de densite, mais plutot de modifications de la composition biochimique des solvants dans lesquels sont dissous les milieux de gradient. Il conviendrait de produire des solutions qui minimiseront la desintegration du tissus exocrine sans compromettre le rendement et la viabilite des ilots. En constatant la faible recuperation d'ilots apres 48 heures de culture (56 %), on peut en conclure que les techniques de culture actuelles des ilots humains et porcins sont imparfaites. Cela resulte en partie du fait que ces techniques actuelles ont ete concues pour des cultures de cellules isolees et pas pour celles de mini-organes insulinosecreteurs dont le metabolisme est eleve. La viabilite cellulaire est notoirement difficile a quantifier aussi bien pour des ilots isoles que pour d'autres tissus. Le principal probleme est que, bien qu'il soit possible de mesurer la fonction insulaire par l'insulinosecretion stimulee par le glucose, il est impossible de la comparer a la fonction des ilots au sein du pancreas entier. Pour cette raison, il n'est pas possible de determiner, en valeur absolue, l'effet de l'isolement d'ilots sur la viabilite insulaire.