Construção de mutantes para os genes ychO, luxS e qseC presentes em uma linhagem de Escherichia coli patogênica para aves (APEC) : análises in vivo e in vitro

Linhagens de Escherichia coli patogenica para aves causam doencas extraintestinais em aves, levando a perdas economicas consideraveis para a industria avicola em todo o mundo. Fatores de virulencia ainda nao conhecidos podem apresentar papeis importantes na patogenicidade, os quais podem ser significativos para o desenvolvimento de medidas de controle de processos infecciosos dessas linhagens. Invasinas permitem que o patogeno invada celulas hospedeiras, sobrepujando as defesas do hospedeiro, por interagir com receptores especificos na superficie celular. Baseando-se em analises do genoma da linhagem APEC SEPT362, detectou-se a presenca de uma provavel invasina, homologa ao gene ychO, ainda nao caracterizado, da linhagem E. coli str. K-12 substr. MG1655, sendo seu efeito na patogenicidade estudado. Neste trabalho, a linhagem SEPT362 deficiente para ychO reduziu a taxa de mortalidade em pintos, a adesao a celulas de fibroblasto de embriao de galinha (FEG), a invasao em celulas fibroblasto de embriao de galinha (CEC-32), a sobrevivencia em macrofagos de aves (HD11), a formacao de biofilme e a motilidade. Esses resultados sugerem, pela primeira vez, que o gene ychO codifica para uma invasina e que tem papel na patogenicidade da linhagem APEC SEPT362. Alem dos diversos fatores de virulencia, o estudo de diferentes tipos de sinais extracelulares que medeiam a comunicacao entre bacterias e regulam a expressao genica abre grandes possibilidades no estudo de mecanismos de patogenicidade e possiveis meios de interferir nos mesmos, transformando organismos patogenicos em organismos nao virulentos. Quorum sensing (QS) e um mecanismo dependente da densidade celular bacteriana que as permitem agir como complexos multicelulares, aumentando suas chances de sobrevivencia no meio ambiente. O sistema QS autoindutor 2 (AI-2) e um sistema de comunicacao universal de bacterias mediado pelo AI-2, produzido pela acao da enzima LuxS. O sistema QS autoindutor 3 (AI-3) e um sistema que pode tambem mediar a comunicacao entre reinos, sendo regulado pela hisitidina quinase QseC. Neste contexto, mutantes para os genes luxS e qseC foram construidos na linhagem SEPT362. A linhagem deficiente para luxS apresentou uma reducao significativa na adesao a celulas FEG, devido a um papel do gene na regulacao da fimbria do tipo 1. A linhagem deficiente para qseC teve uma menor taxa de mortalidade em pintos e uma reducao significativa na adesao a celulas FEG, pela falta da fimbria do tipo 1 no mutante. Abstract