Assessment of viability of yeast by flow cytometry using light green as vital dye exclusion

Se compararon dos tecnicas para valorar la viabilidad de levaduras por medio de citometria de flujo aplicada a microbiologia. En una se uso el colorante yoduro de propidio (YP), el cual al haber un dano de membrana pasa al citoplasma para unirse al DNA o RNA, lo que permite excluir microorganismos danados de los integros, y en la otra se uso el colorante verde claro (VC), ampliamente utilizado en tinciones histologicas, histoquimicas e inmunoquimicas. El modelo de levadura utilizado fue el de muerte por calor en Candida guilliermondii. El analisis de citometria de flujo por diagramas de puntos, en ambos colorantes mostro una separacion muy clara de las poblaciones muertas hacia verde-naranja (350-600 nm) para el VC y rojo (550-725 nm) para el YP, en los canales de fluorescencia correspondientes. Todos los experimentos mostraron entre las poblaciones de levadura vivas y muertas por calor, una prueba de Kolmogorov-Smirnov (K-S) mayor de 99 por ciento de probabilidad de diferencia entre los histogramas de los organismos vivos de los muertos, con una D= con valores de 0.50-0.64 para VC y de 0.91-0.98 para YP. Dado el costo y riesgo de carcinogenesis por el YP, el VC puede ser utilizado en el analisis de viabilidad en levaduras por citofluorometria