外泌体miR-125a-5p对NIH/3T3细胞增殖和凋亡的影响

[背景] 矽肺发生涉及多细胞、多因子的变化和相互作用，其中成纤维细胞是肺纤维过程中关键的效应细胞。近年来研究发现，成纤维细胞的增殖除了受转化生长因子-β等细胞因子的调节之外，外泌体作为细胞间信号的载体也在其中发挥重要的作用。外泌体miRNAs介导的细胞间信号可能在SiO2诱导的成纤维细胞转分化和增殖中发挥作用。前期研究发现miR-125a-5p是一条差异表达的miRNAs。 [目的] 探讨外泌体miR-125a-5p对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3增殖和凋亡的影响。 [方法] 培养RAW264.7细胞，收取上清提取外泌体，并采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析和Western blot对其进行鉴定。设立对照组和SiO2组（100 μg/mL SiO2），观察SiO2粉尘对RAW264.7细胞外泌体及其中miR-125a-5p表达的影响。建立RAW264.7与NIH/3T3的共培养模型，分为对照组、SiO2组（100 μg/mL）和外泌体组（10 μg/mL外泌体作用于NIH/3T3，并且该组无RAW264.7），24、48 h时采用Western blot和CCK-8检测NIH/3T3细胞Ⅰ型胶原（collagenⅠ）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达和增殖活性。培养NIH/3T3细胞，分为模拟剂组、抑制剂组和对照组，于转染24、48 h后收集细胞，采用荧光定量PCR、CCK-8和流式细胞术分别检测NIH/3T3细胞中miR-125a-5p的表达、细胞的增殖活性、细胞周期和凋亡的情况。 [结果] 透射电镜下观察到外泌体具有圆形或茶托样的膜结构。纳米颗粒跟踪分析结果显示外泌体呈聚团或散在分布，粒径大多在30~150 nm。Western blot可检测到外泌体膜标志蛋白TSG101、Alix，未检测到内质网蛋白calnexin。与对照组相比，SiO2粉尘刺激后RAW264.7细胞外泌体含量增多；外泌体膜标志蛋白TSG101和Alix相对表达量升高；miR-125a-5p的相对表达量上升（P [结论] SiO2粉尘引起RAW264.7细胞外泌体中miR-125a-5p升高，且miR-125a-5p可以促进NIH/3T3细胞增殖并抑制凋亡。