转舞毒蛾 LdCYP6AN15v1 基因果蝇品系对氯虫苯甲酰胺胁迫响应

目的 舞毒蛾是林业重要害虫，细胞色素P450是昆虫体内广泛分布的参与外源化合物代谢关键酶系，探讨P450家族基因 CYP6AN15v1 对杀虫剂代谢解毒功能，为舞毒蛾有效治理提供依据。 方法 通过RT-PCR法获得 LdCYP6AN15v1 基因cDNA全长，采用传统酶切连接的方法构建转 CYP6AN15v1 基因果蝇载体，通过转基因技术获得表达 LdCYP6AN15v1 果蝇品系（命名为attP40>CYP6AN15v1）。采用分光光度计法研究低剂量氯虫苯甲酰胺（7.17 mg·L -1 ）处理对转基因和非转基因果蝇品系细胞色素P450活性的影响，并采用qRT-PCR法测定其对 CYP6AN15v1 基因表达的影响。 结果 从舞毒蛾无参照转录本文库中克隆获得 CYP6AN15v1 全长基因，编码512个氨基酸，蛋白分子质量为59.02 kDa；系统进化树分析表明 CYP6AN15v1 与甜菜夜蛾和棉铃虫关系较近。以DNA和cDNA为模板，attP40>CYP6AN15v1果蝇品系均检测到1 539 bp目的基因，表明 LdCYP6AN15v1 基因成功整合到果蝇基因组。与非转基因attP40果蝇品系相比，转基因attP40>CYP6AN15v1果蝇品系对氯虫苯甲酰胺的敏感性显著降低，致死中浓度LC 50 为非转基因果蝇的2.92倍；低剂量（7.17 mg·L -1 ）氯虫苯甲酰胺胁迫下，舞毒蛾细胞色素P450酶活性和 CYP6AN15v1 基因的诱导作用呈现时间效应，attP40>CYP6AN15v1果蝇品系P450活性为非转基因果蝇的1.09~1.93倍，主要表现为诱导效应；attP40>CYP6AN15v1果蝇品系的 CYP6AN15v1 基因mRNA表达量呈诱导激活，其表达量为非转基因的44.54~137.80倍。 结论 利用转基因技术成功构建了转 LdCYP6AN15v1 果蝇品系attP40>CYP6AN15v1；氯虫苯甲酰胺可能通过诱导 LdCYP6AN15v1 基因mRNA的上调表达而增强黑腹果蝇P450酶活性，从而参与对氯虫苯甲酰胺的解毒作用。