D014 Les cellules mononucléées “lineage negative” issues de la moelle osseuse sont une source importante de cellules progénitrices endothéliales

Objectif La therapie cellulaire basee sur l’utilisation de cellules progenitrices endotheliales (CPE) issues de la moelle osseuse ou du sang peripherique permet d’ameliorer la neovascularisation apres un infarctus du myocarde. Cependant, les cellules utilisees lors de telles therapies sont souvent heterogenes, et leur mecanisme d’action mal connu : reelle incorporation dans la paroi vasculaire ou effet paracrine promouvant l’angiogenese ? Ainsi, nous avons voulu identifier quelle sous-population de cellules mononucleees issues de la moelle osseuse de souris contenait le plus de CPE ayant la capacite de generer des cellules endotheliales matures en culture. Methodes Nous avons evalue differentes techniques de selection : la separation par gradient de densite qui permet d’obtenir des cellules mononucleees, les selections magnetiques « Lineage negative » (Lin-), Sca-1+, et c-kit+ ainsi que la selection c-kit+/VEGFR-2+. L’expression des marqueurs endotheliaux matures a ete etudiee par immunocytochimie, cytometrie en flux, et RT-PCR surles colonies obtenues. Resultats Les colonies apparaissaient au 8 e jour de culture. Letri Lin- permettait d’obtenir le plus grand nombre de colonies par rapport aux autres tris. Les analyses immunocytochimiques et cytometriques montraient qu’a l’interieur des colonies Lin-, c-kit+ et de celles derivant des cellules mononucleees, une majorite de cellules etait LDL+, Lectine+, VEGFR-2+, CD31+ et CD144+, c’esta-dire a caractere endothelial mature. Cependant, les colonies derivees des cellules mononucleees semblaient egalement contenir des cellules fibroblastiques comme le montrait une expression plus importante du gene FSP-1. Par ailleurs, la cytometrie en flux a montre que les colonies Sca-1+ n’avaient majoritairement pas un phenotype endothelial (1 a 2 % de cellules VEGFR-2+ et CD31+), et que 35 % des cellules exprimaient le CD11b, correspondant a un phenotype monocytaire. Conclusion La population cellulaire Lin- issue de la moelle osseuse de souris est une source importante de CPE. En effet, la culture de cellules Lin- parait etre la plus adaptee pour generer des cellules endotheliales matures, si on la compare a la culture de cellules Sca-1+, c-kit+ ou de cellules mononucleees. La population Lin- constituerait donc une cible de choix pour la therapie cellulaire destinee a stimuler la vasculogenese.