ساخت سازه چندمنظوره کلروپلاستی برای ایجاد گیاهان تراریخته تولیدکننده بیوپلیمر زیستتخریبپذیر و مقاوم به شوری، خشکی و سرما
2015
چکیده هدف از تحقیق حاضر طراحی و ساخت ناقلین اختصاصی انتقال و بیان کلروپلاستی ژنهای تولید کننده بیوپلیمر و ایجاد تحمل به تنشهای غیرزنده بود. بدینمنظور سه ژن درگیر در مسیر بیوسنتزی پلیهیدروکسی بوتیرات جداسازی شد و صحت جداسازی و عملکردی بودن ژنها پس از بیان در وکتور بیانی و تولید باکتری نوترکیب تولیدکنندهی PHB اثبات گردید. سپس یک کاست بیانی القایی برای این گروه ژنی تحت پیشبر groE و پایانبر Thr طراحی و در راستای نشانگر neo ادغام شده با زیرواحد بزرگ atpB تحت پیشبر و پایانبر کلروپلاستی psbA و بین توالیهای loxP همسانهسازی شد. کاست حاصل در مرکز توالی هدفگیریکننده کلروپلاستی چهارکیلوبازی که از ژنوم پلاستیدی جهت ایجاد امکان الحاق کاستها به داخل ناحیه بین ژنی trnI/trnA ژنوم کلروپلاستی از طریق نوترکیبی همولوگ جداسازی شده بود، همسانهسازی گردید و دو ناقل پلاسمیدی نوترکیب تحت عنوان pFNPi(+) و pFNPi(-) ساخته شد. علاوهبر این ژن badh که با رفع سمیت از بتائین آلدهید علاوهبر ایجاد مقاومت به شوری، خشکی، سرما بهعنوان نشانگر غیرآنتیبیوتیکی نیز قابل استفاده است، پس از حذف اینترونها، بهینهسازی کدونی، حذف جایگاههای شناسایی آنزیمهای اندونوکلئاز داخلی که تحت پیشبر Prrn کلروپلاستی و 5’UTR T7gene10 قرار داده شده بود به وکتور کلروپلاستی مذکور اضافه گردید. سازه حاصل تحت عنوان pFBNPi مناسب برای انتقال ژن به باکتری و ژنوم پلاستیدی گیاه بوده و جهت ایجاد گیاهان مقاوم به شوری، خشکی، سرما و تولیدکنندهی بیوپلیمر زیستتخریبپذیر PHB مورد استفاده قرار خواهد گرفت.
- Correction
- Source
- Cite
- Save
- Machine Reading By IdeaReader
0
References
0
Citations
NaN
KQI