DNA immunization of VP1 gene of coxsackievirus B1

目的构建柯萨奇B1病毒(CVB1)的DNA疫苗,评价其免疫学性状.方法将重组质粒pMD18-T-VPl中的CVB1 VP1基因亚克隆至pCEP4载体,构建真核表达系统pCEP4-VP1作为DNA疫苗,经酶切、PCR和测序鉴定后转染至HeLa细胞,用间接免疫荧光法检测CVB1抗原的体外表达.提纯制备pCEP4 VP1接种BALB/C小鼠,取血清用ELISA法检测抗CVB1 IgM和IgG,用51Cr释放法测定CTL反应.结果酶切、PCR和测序证明VP1 DNA疫苗构建正确;转染pCEP4-VP1的HeLa细胞中可见到荧光标记,提示表达了VP1蛋白;接种pCEP4-VP1的小鼠可检测到抗CVB1的IgM和IgG,并能产生较强的特异性CTL反应.结论pCEP4-VP1可作为DNA疫苗诱导小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答.