The suppressive effect and signal pathway of vitamin E on the expression of minichromosome maintenance protein 4 in prostate cancer cells

目的 探讨维生素E调节前列腺癌细胞DNA复制的新分子机制及信传导通路.方法 利用基因转染、免疫印迹、实时定量聚合酶链反应(PCR)、免疫沉淀等方法研究不同浓度、不同时间琥珀酸维生素E(VES)对前列腺癌细胞内的微小染色体维持蛋白4(MCM4)的mRNA及蛋白表达水平的影响.结果 VES可抑制前列腺癌MCM4 mRNA的表达,并存在时效与量效关系,20 μmol/L VES处理LNCaP细胞36 h,MCM4的mRNA表达水平较对照组下降24.5%(P＜0.05),作用96 h下降达60.3%;随着VES浓度的增加,MCM4 mRNA的表达水平受抑制的程度逐步加深.Western blot表明VES可抑制MCM4蛋白的表达.过表达E2F1可拮抗VES对MCM4的抑制作用.VES抑制Rb磷酸化,增加Rb与E2F1的结合程度.BrdU摄入试验表明20 μmol/L与40 μmol/L VES处理LNCaP细胞24 h后,癌细胞内DNA合成较对照组下降63.4%与71.6%(P＜0.05);48 h后分别达74.8%与81.5%(P＜0.05).结论 我们识别了维生素E抑制前列腺癌细胞DNA复制的一种新机制是下调MCM4的表达,E2F1-Rb蛋白参与这一信号传导通路。