Détection au niveau picogramme du métabolite de la marijuana, le THC-COOH dans les échantillons de cheveux à l’aide d’une analyse LC-MS/MS efficace et sensible

Objectif La marijuana est l’une des drogues recreatives les plus consommees dans le monde. Bien que l’urine et la salive soient tres utiles pour determiner l’usage de marijuana a court terme, les echantillons de cheveux sont extremement utiles pour identifier l’usage a long terme. La presence du metabolite (THC-COOH) dans les cheveux indique un abus actif de drogue. La detection du THC-COOH dans les echantillons de cheveux pose deux defis analytiques majeurs : une faible concentration du metabolite et une interference matricielle elevee. Methodes Les echantillons de cheveux ont ete laves, seches et coupes en segments d’environ 2 mm de longueur et dopes avec un etalon interne deutere (IS). La digestion alcaline a ete effectuee pendant 1 heure, suivie d’une centrifugation. Les surnageants sont ensuite passes dans des cartouches d’extraction a echange anionique fort (SAX) en phase solide pour capter et eluer selectivement le THC-COOH de la matrice. Les extraits d’echantillon ont ete reconstitues en phase mobile pour une analyse en LC-MS/MS a l’aide d’une colonne Kinetex ® Phenyl-Hexyl (50 × 3 mm, 2,6 μm ; Phenomenex). La phase mobile etait constituee par un melange eau et acide acetique/methanol, avec un debit de 750 μL/min. La detection en mode electrospray negatif a ete utilisee avec deux transitions MRM pour le THC-COOH et l’IS. Resultats L’un des plus grands defis pour obtenir des extraits propres de THC-COOH a partir de cheveux a ete la presence de contenus matriciels complexes, dont certains etaient structurellement comme le THC-COOH. Pour eliminer ces interferences, une procedure en mode d’extraction phase solide sur SAX a ete developpee. Il a ete decouvert que les echantillons necessitaient une alcalinisation avec de l’hydroxyde de potassium avant d’etre appliques sur la cartouche afin d’assurer l’extraction selective du THC-COOH par la phase stationnaire SAX fortement chargee en opposition. De plus, il etait necessaire de realiser une etape supplementaire de centrifugation a 15 000 tr/min pendant 5 min pour eliminer les particules insolubles dans les echantillons de cheveux digeres. Pour tester la recuperation des preparations d’echantillons et les effets matrices, trois series d’echantillons ont ete preparees : – des echantillons de cheveux dopes avec du THC-COOH traite avec sur cartouche SAX ; – des echantillons de cheveux sans THC-COOH avant que l’etape d’extraction en phase solide ne soit terminee, pour mesurer la recuperation de la preparation de l’echantillon ; – hydroxyde de potassium enrichi avec du THC-COOH pour mesurer la suppression ou l’amelioration de l’ionisation. Il a ete observe que la recuperation de la preparation de l’echantillon etait a 68 % et que les effets de matrice montraient une perte de signal de 22 % (ou 78 % de recuperation du signal due a la suppression des ions). Cela permet une quantification fiable du THC-COOH a de faibles concentrations, ce qui n’est possible que par la mise en œuvre de la procedure utilisant des cartouches d’extraction en phase solide de type SAX. Conclusion Le flux de travail d’analyse LC-MS/MS combine avec des cartouches de type SAX a permis d’obtenir une limite inferieure de dosage (LLOQ) pour le THC-COOH dans la matrice capillaire de 0,2 pg/mg, la gamme dynamique lineaire de la methode a ete evaluee entre le LLOQ et 2 pg/mg. Le flux de travail a montre une excellente precision (> 95 %) avec une excellente linearite pour l’ion quantifiant (343 > 245) et l’ion qualifiant (343 > 191) avec des valeurs de R 2  de 0,9987 et 0,9983, respectivement. For research use only. Not for use in diagnostic procedures.