耐辐射奇球菌 pprI 和 pprA 基因在真核细胞293T中的表达

以pGADT-7- pprA 、pet28a- pprI 载体为模板,构建pEGFP-N1- pprA 、 pDsRed1-N1-flag- pprI 真核表达载体,脂质体2000介导将两个重组载体共转入293T细胞。双酶切及琼脂糖凝胶电泳显示在4 700、1 000 bp处与4 800、1 100 bp处出现目的条带。测序结果显示构建序列与模板序列一致,氨基酸序列100%正确。荧光显微镜下见到红色和绿色荧光;Western blot结果显示在不同检测水平65 kDa及60 kDa大小处有融合蛋白表达。结果提示pEGFP-N1- pprA 、pDsRed1-N1-flag- pprI 真核表达载体构建成功,并在离体293T细胞中共同表达蛋白。证明原核基因 pprI 、 pprA 能够在真核细胞中共表达,为后续实验验证DR菌高抗性基因 pprA 、 pprI 及其产物在辐射调控网络中的相互作用和协同作用、提高真核细胞的辐射抗性提供了研究基础。