日本血吸虫Sj CyclophilinA基因的克隆、表达及其生物学功能研究

【目的】克隆和表达了日本血吸虫CyclophilinA（SjCyPA）编码基因cDNA，分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况，评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中，PCR扩增-EST序列的基因全长cDNA，提交到NCBI，登录号为GQ403666。应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况，以pET28a（＋）为载体构建重组表达质粒，并在大肠杆菌中表达。诱导、表达、纯化和复性重组蛋白，测定其PPIase活性。利用Western blot检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠，评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。【结果】PCR获得了sjCyPA编码基因的全长cDNA，其开放阅读框为519bp。荧光实时定量PCR分析表明，该基因在13d童虫表达量最高，为童虫期高表达基因。构建了重组表达质粒pET28a（＋）-SjCyPA，并在大肠杆菌中成功表达。复性重组蛋白具有PPIase活性。Westernblot试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性，在小鼠免疫试验中，与空白对照组比较，免疫组小鼠获得18．72％的减虫率和44．6％的肝脏减卵率。【结论】获得了日本血吸虫童虫期高表达的sjCyPA基因的全长cDNA，成功构建了彤CyPA原核重组表达质粒，在大肠杆菌中成功表达，纯化复性得到有PPIase活性的彤CyPA重组蛋白，并证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。