Tyrosine kinases modulate the activity of single L-type calcium channels in vascular smooth muscle cells from rat portal vein

Dans une etude anterieure, nous avons demontre que l'application extracellulaire de l'inhibiteur de la tyrosine kinase, genisteine, provoquait une inhibition dose-dependante des courants Ca 2+ (type L) lents macroscopiques des cellules du muscle lisse vasculaire (MLV) et que la daidzeine, un analogue inactif de la genisteine, n'exercait pas un tel effet. Ces resultats ont suggere que les canaux Ca 2+ de type L des cellules du MLV pourraient etre modules par l'activite de la tyrosine kinase endogene. Dans le but de confirmer ces resultats et d'elargir cette etude, nous avons examine l'effet de la genisteine sur l'activite de canaux Ca 2+ unitaires dans des cellules de MLV fraichement isolees de la veine porte de rat, en effectuant un enregistrement sur la cellule par la methode du patch clamp. La pipette etait remplie d'une solution contenant 90 mM de Ba 2+ comme porteur de charge et 0,5 μM de Bay K 8644 (pour stimuler l'activite basale des canaux), et la preparation contenait 140 mM de KCI pour fixer le potentiel de membrane de repos. La depolarisation des impulsions a 0 mV, a partir d'un potentiel de maintien de -80 mV, a induit des courants unitaires entrants qui ont ete bloques par 1 μM de nifedipine (n = 6). La conductance de pente des courants Ca 2+ unitaires a donne une valeur de 21,5 + 0,4 pS (n = 9) pour les canaux Ca 2+ . L'addition de genisteine (50 μM) au bain de la preparation n'a modifie ni la conductance de pente ni l'amplitude des canaux unitaires: en presence de genisteine, la conductance a ete de 22,2 + 0,5 pS (n = 6). Toutefois, comparativement a l'activite temoin, celle des canaux Ca 2+ unitaires a ete significativement inhibee, de maniere dose-dependante, par la genisteine. Les courants moyens ont ete diminues de 48,4 + 11,2% avec 50 μM de genisteine, alors que 100 pM de genisteine ont inhibe les courants Ca 2+ de 76,8 + 11,8%. La probabilite d'ouverture (NP 0 ) a ete diminuee de 0,24 ± 0,09 a 0,11 ± 0,07 par 50 μM de genisteine. L'etude cinetique des canaux unitaires a montre que la genisteine a diminue le temps d'ouverture moyen et prolonge le temps de fermeture moyen. L'effet inhibiteur de la genisteine sur l'activite des canaux Ca 2+ s'est produit en moins de 3 min et a pu etre renverse par un lavage de 3-5 min. La daidzeine, en concentrations allant jusqu'a 300 μM, n'a pas induit de variation de l'activite des canaux Ca 2+ unitaires. Ces resultats demontrent que la genisteine inhibe l'activite des canaux Ca 2+ de type L dans les cellules du MLV, suggerant que la disponibilite des canaux relativement a l'activation de la tension pourrait etre maintenue via la phosphorylation de la tyrosine kinase tonique.